蛋白质DNS分析法DNS—Cl(膜层析技术)

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蛋白质DNS分析法DNS—Cl(膜层析技术)

一、实验目的1.掌握DNS 分析法测定氨基酸的原理与方法。2.进一步熟悉薄膜层析的操作。二、实验原理荧光试剂二甲氨基萘磺酰氯即DNS—Cl(Dansyl—Cl),能与所有氨基酸的氨基结合,生成荧光物质DNS—氨基酸。DNS—Cl 也能与蛋白质或多肽的游离氨基结合,生成DNS—蛋白质或DNS—肽,经酸水解后释放出DNS—氨基酸。各种DNS—氨基酸与聚酰胺薄膜形成氢键的能力个同,即在溶剂与聚酰胺薄膜之间的分配系数不一样,故可用聚酰胺薄膜层析分离各种DNS—氨基酸。DNS—氨基酸在360nm 或280nm 波长的紫外光照射下,发出黄色荧光,很方便进行检测。蛋白质和多肽经酸水解后,肽键断裂,生成游离氨基酸,所有氨基酸都能与DNS—Cl 反应。所以DNS—Cl 法可用于蛋白质或多肽氨基酸组成的微量分析。在pH 值过高的情况下,DNS—Cl 会发生水解生成副产物DNS—NH2,DNS—OH 和DNS—Cl在紫外灯下产生蓝色荧光,可以与DNS......阅读全文

什么是荧光分析法

利用荧光强度进行分析的方法,称为荧光法。 在荧光分析中,待测物质分子成为激发态时所吸收的光称为激发光,处于激发态的分子回到基态时所产生的荧光称为发射光。 荧光分析法测定的是受光激发后所发射的荧光强弱。

2022-02-13 15:29

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2020-09-15 19:12

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